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细胞生长速度变慢或细胞形态变差的原因较为复杂，可从细胞，细胞培养液，污染，操作等方面去分析。比如：细胞衰老、细胞代次过高、细胞被胰酶消化过度，细胞培养液配制或储存不当，支原体污染，细胞接种密度低，温度/CO₂浓度/pH等生化条件变化方面去分析，也需要考虑到血清是否有更换，血清来源不可靠，质量不稳定均会导致细胞状态出现变化。

细胞驯化过程是细胞优胜劣汰，适者生存的过程，状态不好或者死亡的细胞特别容易结团。在驯化过程中可以采用低速离心，自然沉降，胰酶消化，添加硫酸葡聚糖等方法逐步去除较大的细胞结团，不断传代驯化。另外，细胞出现结团与细胞培养基是否适应，与Ca ²⁺，Mg ²⁺离子浓度，种子细胞质量等有较大关系。

丙酮酸钠可作为替代碳源。尽管细胞倾向于以葡萄糖作为碳源，但是在没有葡萄糖时，细胞可以代谢丙酮酸钠。

不添加生长因子。

内毒素的控制必须从培养基配方开发到最终生产进行全程监控。配方开发时动物源性蛋白的选择与否、各类原材料的供应商筛选、生产车间净化级别、生产设备和器具的消毒、物料干燥、生产过程控制、人员操作规范等全过程控制内毒素，严格执行 GMP 管理制度，生产高质量培养基。

对于大部分昆虫细胞，pH 在 6.0-6.4 范围效果较好，最适渗透压在 345-380mOsm/kg。

（1）这是边缘效应的体现，细胞工厂面积稍大，会有受热不匀的情况，可以提前在工厂中加入培养液放置温箱预热好，现象会有所改善。

（2）目前我们的细胞工厂用的是普通材质的，较cell bind处理过的细胞贴壁生长效果会稍差一些，一般就使用一次，边缘有少星细胞脱落影响不是很大。

建议2-3代，从复苏时的10%NBS逐步降为无血清培养。

天信和630培养基所培养的Vero无血清细胞形态与进口培养基有一定区别，主要因为两种培养基成分差异及天信和630培养基的冰点渗透压高于进口培养基20%，但并不影响细胞生长与后期接毒，且天信和630培养基培养Vero细胞生长速率高于进口培养基，宿主细胞DNA、宿主细胞蛋白含量等明显低于进口培养基，有明显的优势，目前暂时不做调整。

低密度接种，稍微延长培养时间，细胞也可生长至致密，但暂未尝试低密度连续传代，目前天信和推荐稍高密度接种，更有利于细胞状态与增殖速度的保持。

细胞具体生长密度和细胞来源、细胞状态、接种密度、培养基、环境控制有关，没有比较固定的数量。但确定了具体细胞、培养基、培养条件，细胞每代数据应平行。

根据厂家提供培养基使用说明就能保证培养基安全有效。血清即可过滤前添加也可过滤后添加，具体根据无菌控制要求操作。

细胞工厂为一次性使用产品，不建议重复使用。如需反复使用，接毒后有大量完整细胞残留，可用胰酶消化后PBS冲洗干净辐照灭菌继续使用；接毒后细胞破碎，可用碱液浸泡后PBS清洗干净辐照灭菌继续使用。

细胞消化时需要注意胰酶添加量控制，保证每1层细胞工厂有适量胰酶流入。胰酶作用消化时，密切关注细胞脱落变化情况，及时终止消化。如有轻微结团可在消化终止后用力摇晃细胞工厂的细胞悬液数次。